抗體 - 藥物偶聯(lián)物（ADCs）是治療實體瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤極具前景的創(chuàng)新型治療復合物。與治療性單克隆抗體不同，ADCs借助單克隆抗體與細胞毒性有效載荷的連接，可向靶向癌細胞精準遞送強效毒素。

隨著ADC藥物開發(fā)進程的不斷加快以及應用場景的持續(xù)拓展，其研發(fā)也面臨著更高的挑戰(zhàn)。一方面，需進一步增強有效載荷的細胞毒性與靶向精準度，減少對正常細胞的損害；另一方面，要優(yōu)化抗體與毒素的偶聯(lián)方式，確保藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性和藥代動力學特性良好，同時還要探索更廣泛的作用靶點以及聯(lián)合治療策略，以此應對腫瘤的異質性和耐藥性問題。在ADC藥物研發(fā)的早期階段，全面且深入地探究藥物的作用機制與潛力，能夠有效提升研發(fā)效率、降低后續(xù)研發(fā)風險，推動創(chuàng)新ADC藥物更快速地從實驗室邁向臨床應用，為攻克癌癥這一醫(yī)學難題注入更強勁的動力。

圖1. 新型抗體 - 藥物偶聯(lián)物（ADCs）的主要特征及其對未來藥物研發(fā)的潛在意義^[1]

案例一：抗原表達

目的：評估8種細胞系中c-Met和HER2的表面表達情況，以確定其是否適合作為ADC的靶向對象。

方法：流式細胞術分析。

結果：c-Met和HER2在腫瘤細胞中廣泛分布，這為雙靶點ADC或聯(lián)合療法提升癌癥治療效果提供了良好潛力。

圖2. 8種細胞系中HER2和c-Met的表面表達

案例二：細胞結合試驗

目的：評估ABBV-399（c-Met ADC藥物）與腫瘤細胞上c-Met的結合親和力。

方法：流式細胞術分析。

結果：ABBV-399對所有三種腫瘤細胞系均顯示出結合能力，其結合特征與Telisotuzumab（c-Met抗體）相似。

圖3. ABBV-399在不同癌細胞系中的結合試驗

案例三：細胞毒性試驗

目的：篩選多種腫瘤細胞系，找出對ABBV-399介導的細胞毒性高度敏感的細胞系。

方法：CellTiter-Glo（CTG）試驗。

結果：ABBV-399對四種腫瘤細胞系表現(xiàn)出強效的細胞毒性，其療效與c-Met過表達水平密切相關。值得注意的是，在SNU-5細胞系中，與游離的細胞毒性有效載荷（MMAE）相比，ABBV-399展現(xiàn)出顯著更強的抗增殖作用。

圖4. ABBV-399對腫瘤細胞系的量效曲線

表 1. 腫瘤細胞體外c-Met表達及對ABBV-399的敏感性

案例四：內(nèi)吞作用

目的：使用pH敏感型熒光染料pHrodo?評估ABBV-399細胞水平內(nèi)吞作用。

方法：流式細胞術分析。

結果：ABBV-399與Telisotuzumab表現(xiàn)出相似的內(nèi)化效果，且內(nèi)化比例與時間呈正相關。在c-Met陽性的NCI-H1650細胞中檢測到較低的內(nèi)化信號，這或許能解釋ABBV-399與該細胞結合卻未發(fā)揮細胞毒性的現(xiàn)象。

圖5. ABBV-399的內(nèi)化動力學

案例五：細胞周期和凋亡試驗

目的：評估DS-8201a對靶細胞SK-BR-3細胞周期和凋亡的影響。

方法：流式細胞術分析。

結果：處理48小時后，與對照組相比，DS-8201a組S期細胞比例顯著增加，有效載荷通過抑制拓撲異構酶I使細胞周期停滯在S期（圖 6）。與對照組相比，DS-8201a組凋亡細胞比例顯著上升，有效載荷可通過細胞周期依賴或非依賴的方式誘導細胞凋亡（圖 7）。

圖6. 不同濃度DS-8201a對靶細胞SK-BR-3細胞周期的影響

圖7. 不同濃度DS-8201a在靶細胞SK-BR-3中誘導的凋亡

案例六：體外共接種條件下的旁觀者殺傷作用（流式細胞術，F(xiàn)ACS）

目的：評估DS-8201a對HER2陽性和HER2低表達腫瘤細胞的旁觀者效應。

方法：流式細胞術分析。

結果：DS-8201a對HER2陽性的SK-BR-3細胞具有直接細胞毒性，且在共培養(yǎng)中對抗原陰性的MDA-MB-468細胞表現(xiàn)出旁觀者殺傷效應。

圖8. ABBV-399的體外旁觀者殺傷效應

（a）流式細胞術的群體分析（b）DS-8201a處理后存活的SK-BR-3和MDA-MB-468細胞數(shù)量

案例七：體外共接種條件下的旁觀者殺傷作用（熒光素酶報告細胞）

目的：將不同水平c-Met表達的SNU-5細胞（ADC靶細胞）與c-Met低表達的熒光素酶陽性細胞（報告細胞，A549-NSCLC和NCI-H82-SCLC）以2:1的比例混合，并用ABBV-399處理。孵育6天后，測定熒光素酶活性以評估報告細胞情況，測定CTG活性以評估SNU-5細胞情況。

方法：熒光素酶報告細胞和CTG試驗。

結果：在SNU-5（c-Met表達細胞）與A549-luc或NCI-H82-luc報告細胞（均為c-MET低表達）的共接種體系中，ABBV-399以濃度依賴的方式降低了報告細胞混合物的活力。這表明 ABBV-399介導了濃度依賴的旁觀者殺傷效應。

圖9. ABBV-399的體外旁觀者殺傷效應

集萃藥康（GemPharmatech）的ADC評估平臺能夠實現(xiàn)從抗原分析、結合親和力到內(nèi)化效率和腫瘤細胞殺傷等方面的全面體外評估，可系統(tǒng)開展ADC藥物全方位評估，為候選藥物的篩選與優(yōu)化提供強有力的技術支持，提升臨床前研究成功率。