IL15（白細(xì)胞介素-15）是一種由活化的單核－巨噬細(xì)胞、表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生的多效性細(xì)胞因子，發(fā)揮類似IL2的生物學(xué)活性，具有激活T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞的作用，并可介導(dǎo)這些細(xì)胞的增殖和存活功能。huHSC-NCG-hIL15能重建有功能性的T細(xì)胞和NK細(xì)胞，生存周期大于39周，可用于腫瘤免疫治療藥物的研究。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 用于人源細(xì)胞、組織移植；

2. 接種人源腫瘤用于篩選相關(guān)藥物，特別是基于ADCC作用的藥效評價(jià)；

3. 用于人類造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)研究。

實(shí)驗(yàn)流程

驗(yàn)證數(shù)據(jù)

圖1. NCG-hIL15小鼠外周血中人源IL15表達(dá)水平

NCG-hIL15人源化小鼠的雜合子及純合子中均能檢測到人源IL15的表達(dá)，純合子表達(dá)水平高于雜合子。

圖2. huHSC-NCG-hIL15重建過程中主要重建T、NK細(xì)胞

huHSC-NCG及huHSC-NCG-hIL15小鼠外周血中各免疫細(xì)胞的重建水平。于7、9、11、13周收集huHSC-NCG及huHSC-NCG-hIL15小鼠外周血，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測huHSC-NCG小鼠及huHSC-NCG-hIL15小鼠人源化進(jìn)程。檢測指標(biāo)為hCD45, hCD3, hCD19, hCD4, hCD8, hCD56。隨著免疫重建進(jìn)程，5周左右huHSC- NCG-hIL15小鼠外周血中hCD45+白細(xì)胞水平在已達(dá)20%以上，其中hCD3+ T細(xì)胞水平逐漸增加，且分化出hCD4+及hCD8+ T細(xì)胞亞群。與huHSC-NCG小鼠相比，CD56+NK細(xì)胞重建水平明顯升高。

圖3. huHSC-NCG及huHSC-NCG-hIL15小鼠外周血中NK細(xì)胞功能基因表達(dá)檢測

于13周收集huHSC-NCG及huHSC-NCG-hIL15小鼠外周血，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測huHSC-NCG小鼠及huHSC-NCG-hIL15小鼠外周血中重建的人源NK細(xì)胞功能基因表達(dá)情況。檢測指標(biāo)為CD56、CD16、KIR3DL、NKG2D。與huHSC-NCG相比，huHSC-NCG-hIL15小鼠人源NK細(xì)胞重建水平顯著升高，且可以表達(dá)KIR3DL、NKG2D功能性蛋白。

圖4. 基于huHSC-NCG-hIL15的體外藥效實(shí)驗(yàn)

隨著效靶比的增加(NK：K562=2: 1，5: 1，10: 1)，NCG-IL15人源化小鼠重建NK細(xì)胞對于人慢性髓系白血病細(xì)胞K562的殺傷率也隨之增加。隨著效靶比的增加(NK：Raji=2: 1，5: 1)，NCG-IL15人源化小鼠重建NK細(xì)胞對于Raji細(xì)胞的殺傷率也隨之增加。加入0 μg/mL及10 μg/mL的Rituximab(靶向CD20抗體，主要通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用ADCC殺傷CD20+腫瘤細(xì)胞)，Rituximab抗體通過NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC作用， 對Raji細(xì)胞的殺傷作用進(jìn)一步增強(qiáng)。

圖5. 基于huHSC-NCG-hIL15的體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)

將對數(shù)生長期人淋巴瘤細(xì)胞Raji細(xì)胞接種到huHSC-NCG-hIL15小鼠皮下，待腫瘤生長至平均體積約40-50 mm 3時(shí)，隨機(jī)分為PBS組，Rituximab給藥組及Blincyto給藥組，并使用相應(yīng)的藥物進(jìn)行治療。結(jié)果顯示： Rituximab組（TGI=48.95%）及Blincyto組（TGI=59.67%）對huHSC-NCG-hIL15的Raji細(xì)胞荷瘤鼠上腫瘤生長有抑制作用。