一、體外藥物活性篩選

1. 細(xì)胞模型：HepG2，人源化小鼠組織的原代細(xì)胞（如肝臟原代細(xì)胞）等

2. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：（1）非修飾siRNA的細(xì)胞轉(zhuǎn)染以及靶基因水平檢測(cè)；（2）修飾siRNA的細(xì)胞自由攝取以及靶基因水平檢測(cè)。

3. 檢測(cè)指標(biāo)：q-PCR，WB，Elisa

二、體內(nèi)藥物分布

1. 動(dòng)物模型：BALB/c

2. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：小核酸藥物（熒光基團(tuán)標(biāo)記）投遞至動(dòng)物體內(nèi)后分時(shí)間段檢測(cè)藥物在各臟器中的分布，以評(píng)估藥物在進(jìn)入體內(nèi)后的分布特點(diǎn)或比較不同修飾藥物在體內(nèi)的分布特點(diǎn)。

3. 檢測(cè)指標(biāo)：活體熒光成像

三、non-GLP安全性評(píng)價(jià)

1. 動(dòng)物模型：C57BL/6J等近交系，藥靶基因人源化小鼠

2. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：?jiǎn)未谓o藥毒性測(cè)試，多次給藥毒性測(cè)試

3. 檢測(cè)指標(biāo)：體重、臨床觀察、肝功（ALT，AST），腎功（BUN，CREA），細(xì)胞損傷（LDH），免疫原性檢測(cè)（Elisa Kit），大體剖檢觀察，組織病理檢測(cè)等

四、體內(nèi)藥理藥效

1. 動(dòng)物模型：藥靶基因人源化小鼠（B6-hPCSK9，B6-hAPOC3-Tg，B6-hAGT，B6-hXDH，B6-hAPOB-Tg等，持續(xù)更新中，敬請(qǐng)關(guān)注藥篩鼠計(jì)劃）

2. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：（1）藥靶基因人源化小鼠給予相應(yīng)藥物干預(yù)后檢測(cè)靶基因的敲降效率及上下游關(guān)聯(lián)基因的表達(dá)水平；（2）藥靶基因人源化小鼠經(jīng)特殊飲食或其他方式構(gòu)建疾病模型后給予藥物干預(yù)，觀測(cè)疾病指標(biāo)的變化。

3. 檢測(cè)指標(biāo)：體重、血脂四項(xiàng)、肝功、腎功、血液中蛋白表達(dá)（Elisa kit），組織器官中基因表達(dá)水平（q-PCR，WB or Elisa kit等），組織病理學(xué)檢測(cè)（H&E，IHC等）

案例1：PCSK9人源化小鼠（攜帶人源化3’UTR）在小核酸臨床前藥效評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

圖1. Inclisiran單次皮下給藥后顯著降低血液中hPCSK9的表達(dá)水平，且對(duì)hPCSK9的抑制效果可維持到單次給藥后56天。

案例2：人源APOC3轉(zhuǎn)基因小鼠在小核酸臨床前藥效評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

圖2. 靶向hAPOC3的小核酸單次皮下給藥后顯著降低APOC3人源化小鼠血液中的甘油三酯（TG）、總膽固醇（Chol）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平

圖3 靶向hAPOC3的小核酸單次皮下給藥后顯著降低APOC3人源化小鼠血液中人源APOC3的表達(dá)