ApoE KO模型及其藥效評價
動脈粥樣硬化是一種由脂肪、膽固醇、鈣和其他物質(zhì)在動脈內(nèi)皮中沉積引起的慢性疾病，由于血管增厚和硬化而導(dǎo)致動脈彈性的喪失。一旦厚斑塊嚴重阻塞動脈，可以顯著減少動脈服務(wù)的組織中流向血管的血液，從而造成嚴重的組織損傷。集萃藥康構(gòu)建了ApoE敲除模型和Ldlr敲除模型，可用于動脈粥樣硬化癥的研究，同時可承接相應(yīng)藥物的評價服務(wù)。
模型介紹
APOE 主要負責(zé)脂蛋白、脂溶性維生素和膽固醇的轉(zhuǎn)運。在外周組織中，APOE 主要由肝臟和巨噬細胞產(chǎn)生，介導(dǎo)膽固醇代謝。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，APOE 主要由星形膠質(zhì)細胞產(chǎn)生，通過 APOE 受體將膽固醇轉(zhuǎn)運至神經(jīng)元。此外，APOE 是大腦中膽固醇的主要載體。研究表明，APOE 缺陷小鼠在清除血漿中的乳糜微粒、極低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）方面存在障礙，膽固醇含量顯著升高。Apoe 小鼠對膽固醇極為敏感，當膽固醇進入血漿后會發(fā)生積聚。大約 3 個月時，主動脈附近出現(xiàn)脂肪條紋，形成動脈粥樣硬化前期病變，并隨著年齡增長而發(fā)展。老年 Apoe 缺陷小鼠（超過 17 個月）會出現(xiàn)由膽固醇結(jié)晶凝塊、脂滴和泡沫細胞組成的黃瘤病變，在脈絡(luò)叢和腹側(cè)肌腱中可見較小的黃瘤。研究還發(fā)現(xiàn)，Apoe 基因敲除小鼠存在學(xué)習(xí)和記憶障礙。
驗證數(shù)據(jù)
① APOE 蛋白表達的測定
圖 1. 大腦和肝臟組織中 APOE 的蛋白表達
使用特異性抗體（Abcam，ab183596）通過蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）測定大腦和肝臟組織中 APOE 的蛋白表達。WT：C57BL/6JGpt 野生型小鼠；KO：Apoe-KO 純合子小鼠。（數(shù)據(jù)來源：Abcam 合作驗證）
② 血脂檢測
圖 2. ApoE-/-小鼠血脂檢測
與野生型小鼠相比，喂食西方飲食（WD）（D12079B）的ApoE-/-小鼠的膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平顯著升高。
③ 病理分析
圖 3. ApoE-/-小鼠主動脈的H&E染色和油紅 O 染色
從 8 周齡開始，給 ApoE-/- 小鼠喂食普通飼料（CD）和西方飲食（WD）（D12079B）。飼喂西方飲食 12 周后，通過 H&E 染色可在主動脈根部觀察到面積較大的動脈粥樣硬化斑塊。通過對整根主動脈進行油紅 O 染色，也可檢測到富含脂質(zhì)的斑塊（紅色）。配對 t 檢驗，**，p<0.01。
④ 藥效數(shù)據(jù)
圖 6. 洛美他派（Lomitapide）對ApoE-/-小鼠的降脂作用
數(shù)據(jù)以Mean±SD表示，采用雙因素方差分析（Two-Way ANOVA）。* ，** ，**分別表示 p<0.05，p<0.01，p<0.001。