TIGIT (T cell immunoglobulin and ITIM domain)，是一個(gè)Ⅰ型跨膜蛋白，胞外區(qū)帶有一個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)含有ITIM結(jié)構(gòu)域，主要在T-cell和NK-cell表面表達(dá)。

機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)TIGIT的缺失導(dǎo)致MOG肽段免疫后的T細(xì)胞應(yīng)答增強(qiáng)，顯示TIGIT是T細(xì)胞的抑制性受體。

目前認(rèn)為TIGIT對(duì)細(xì)胞的抑制功能通過兩種方式實(shí)現(xiàn)，一種是TIGIT直接作用于細(xì)胞自身，通過下調(diào)TCRα鏈削弱介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制細(xì)胞的活化^[1]；另一種是通過觸發(fā)APC上的PVR配體下游信號(hào)通路，增強(qiáng)信號(hào)分子ERK磷酸化水平，增強(qiáng)APC分泌抗炎因子IL-10，IL-10再反過來作用細(xì)胞，從而抑制T細(xì)胞應(yīng)答^[2]。Genentech的TIGIT抗體MTIG7192A臨床研究顯示，單獨(dú)或者和PD-L1抗體Atezolizumab聯(lián)用可治療晚期或轉(zhuǎn)移性腫瘤。

構(gòu)建策略：集萃藥康通過將BALB/c及C57BL/6小鼠的TIGIT基因編碼胞外區(qū)替換為相應(yīng)的人源片段，完整保留了小鼠TIGIT蛋白的胞內(nèi)部分，成功構(gòu)建了TIGIT人源化小鼠模型，包括單人源化小鼠BALB/c-hTIGIT及C57BL/6-hTIGIT,雙人源化小鼠BALB/c-hPD1/hTIGIT及C57BL/6-hPD1/hTIGIT，和三人源化小鼠BALB/c-hPD1/hPDL1/hTIGIT。TIGIT人源化小鼠模型是人TIGIT抑制劑藥效評(píng)價(jià)的理想動(dòng)物模型。

1. BALB/c-hTIGIT/及B6-hTIGIT體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)

分別在BALB/c-hTIGIT小鼠模型皮下接種CT26.WT腫瘤細(xì)胞系及B6-hTIGIT小鼠模型皮下接種MC38腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人TIGIT抗體的腫瘤抑制藥效。

左圖：BALB/c-hTIGIT體內(nèi)藥效；右圖：B6-hTIGIT體內(nèi)藥效

基于BALB/c-hTIGIT與B6-hTIGIT的體內(nèi)藥效對(duì)比試驗(yàn)。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的結(jié)腸癌細(xì)胞CT26.WT與MC38分別皮下接種BALB/c-hTIGIT與B6-hTIGIT小鼠，待腫瘤生長(zhǎng)至平均體積約80-120 mm³時(shí)隨機(jī)分為對(duì)照組及anti-hTIGIT單藥組（n=10），每周給藥2次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示：BALB/c-hTIGIT小鼠接種CT26.WT腫瘤后，使用抗人TIGIT抗體治療，顯示出良好的抗腫瘤效果（TGI=40.26%）; 而B6-hTIGIT小鼠接種MC38腫瘤后，使用抗人TIGIT抗體治療，未見腫瘤抑制效果（TGI=12.03%）。

結(jié)果表明：與接種MC38細(xì)胞的B6-hTIGIT小鼠模型相比，抗人TIGIT抗體在接種CT26.WT細(xì)胞的BALB/c-hTIGIT小鼠模型體內(nèi)藥效更顯著，說明BALB/c-hTIGIT小鼠模型是評(píng)估抗人TIGIT藥效的理想模型。

2. BALB/c-hPD1/hTIGIT及B6-hPD1/hTIGIT體內(nèi)藥效

分別在BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型皮下接種CT26.WT腫瘤細(xì)胞系及B6-hPD1/hTIGIT小鼠模型皮下接種MC38腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人TIGIT抗體的腫瘤抑制藥效。

左圖：BALB/c-hPD1/hTIGIT體內(nèi)藥效；右圖：B6- hPD1/hTIGIT體內(nèi)藥效

基于BALB/c-hPD1/hTIGIT與B6-hPD1/hTIGIT的體內(nèi)藥效對(duì)比試驗(yàn)。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的結(jié)腸癌細(xì)胞CT26.WT與MC38分別皮下接種至 BALB/c-hPD1/hTIGIT與B6-hPD1/hTIGIT。待腫瘤平均體積生長(zhǎng)至80-120 mm³時(shí)，隨機(jī)分為對(duì)照組及Anti-hTIGIT單藥組（n=6），每周給藥2次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示： BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠接種CT26.WT腫瘤后，使用抗人TIGIT抗體治療，顯示出良好的抗腫瘤效果（TGI=79%，而B6-hPD1/hTIGIT小鼠接種MC38腫瘤后，使用抗人TIGIT抗體治療，未見腫瘤抑制效果。因此，與接種MC38細(xì)胞的B6-hPD1/hTIGIT小鼠模型相比，抗人TIGIT抗體在接種CT26.WT細(xì)胞的BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型體內(nèi)藥效更顯著。

結(jié)果表明：BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型是評(píng)估抗人TIGIT藥效的理想模型。

3. BALB/c-hPD1/hTIGIT：評(píng)價(jià)Keytruda與Triagolumab、M Triagolumab 抗體抗腫瘤藥效作用

在BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型皮下接種CT26.WT腫瘤細(xì)胞系測(cè)試抗人PD1抗體（keytruda）、Triagolumab及M Triagolumab的腫瘤抑制藥效。

（數(shù)據(jù)來自第三方合作驗(yàn)證）

基于BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠藥效實(shí)驗(yàn)。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的結(jié)腸癌細(xì)胞CT26.WT皮下接種至 BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠。待腫瘤平均體積生長(zhǎng)至80-120 mm³時(shí)，隨機(jī)分為Human IgG1組，Keytruda單藥組、Tiragolumab單藥組、M Tiragolumab單藥組及Keytruda+ Tiragolumab聯(lián)合給藥組（n=8），每周給藥2次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示：Keytruda治療組和Tiragolumab治療組，其腫瘤體積的抑制率（TGI）分別為56.79%、75.34%，顯示對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)有一定的抑制作用；聯(lián)合用藥組Keytruda+ Tiragolumab聯(lián)合給藥組顯示出更為顯著的腫瘤抑制作用， TGI為88.94%。M  Tiragolumab將Tiragolumab的Fc部分進(jìn)行突變，從而消除Tiragolumab介導(dǎo)ADCC(抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用)，無法有效抑制腫瘤生長(zhǎng)(TGI=10.04%)。

結(jié)果表明： BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠是篩選和評(píng)價(jià)人源PD1、TIGIT抗體及聯(lián)合用藥的理想動(dòng)物模型，同時(shí)可以用于抗體藥物ADCC作用的評(píng)價(jià)。

參考文獻(xiàn)

[1] Joller, Nicole, et al. "Cutting edge: TIGIT has T cell-intrinsic inhibitory functions." The Journal of Immunology 186.3 (2011): 1338-1342.

[2] Stanietsky, Noa, et al. "The interaction of TIGIT with PVR and PVRL2 inhibits human NK cell cytotoxicity." Proceedings of the National Academy of Sciences 106.42 (2009): 17858-17863.