LAG3（Lymphocyte activation protein 3），淋巴細(xì)胞活化蛋白3，在活化的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞上表達(dá)^[1,2]。LAG3基因編碼的膜蛋白包含四個(gè)免疫球蛋白超級(jí)家族結(jié)構(gòu)域，在結(jié)構(gòu)和染色體定位方面與CD4非常相似^[3]，但它以更高的親和力與MHC II（主要組織相容性復(fù)合體II類分子）結(jié)合^[4]，并負(fù)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能^[5,6]。研究表明，敲除LAG3基因或體內(nèi)抗體阻斷LAG3功能，可使器官或腫瘤中的抗原特異的CD8+T細(xì)胞的聚集和效應(yīng)功能增加^[7]。因此，阻斷LAG3是一種潛在的腫瘤治療方法。

構(gòu)建策略：集萃藥康通過(guò)將BALB/c及C57BL/6小鼠Lag3基因編碼胞外區(qū)的部分替換為相應(yīng)的人源基因序列，保留了鼠Lag3基因的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)，成功構(gòu)建了LAG3人源化小鼠模型，包括單人源化小鼠BALB/c-hLAG3及C57BL/6-hLAG3和雙人源化小鼠BALB/c-hPD1/hLAG3及C57BL/6-hPD1/hLAG3。LAG3人源化小鼠模型是人LAG3抑制劑藥效評(píng)價(jià)及安全性評(píng)價(jià)的理想動(dòng)物模型。

1. C57BL/6-hLAG3：mPD1和hLAG3抗體藥效實(shí)驗(yàn)

在B6-hLAG3小鼠皮下接種MC38腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人LAG3抗體腫瘤抑制藥效。

左圖：小鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線  右圖：小鼠體重變化曲線

基于B6-hLAG3小鼠皮下接種MC38模型的體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)。 將結(jié)腸癌細(xì)胞MC38培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后接種至6-8周齡的B6-hLAG3（LAG3人源化小鼠）皮下，待腫瘤生長(zhǎng)至平均體積約90 mm³時(shí)隨機(jī)分為Vehicle（對(duì)照）組、anti-mPD1單藥組、anti-hLAG3單藥組、anti-mPD1和 anti-hLAG3聯(lián)用組（n=7），使用相應(yīng)藥物進(jìn)行治療。每周給藥2次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示：anti-mPD1單藥組、anti-hLAG3單用組對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制作用?。╝nti-mPD1單藥組TGI=19.13% , anti-hLAG3單藥組TGI=21.13%），anti-mPD1和 anti-hLAG3聯(lián)用組對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制作用大（TGI=40.69%）（左圖），小鼠體重變化趨勢(shì)一致（右圖）。

結(jié)果證明：LAG3人源化小鼠是評(píng)估anti-hLAG3抗體體內(nèi)藥效的有力工具。

2. C57BL/6-hPD1/hLAG3：Anti-hPD1及Anti-hLAG3抗腫瘤藥效

在B6-hPD1/hLAG3小鼠皮下接種MC38腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人PD1和LAG3抗體腫瘤抑制藥效。

左圖：小鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線；右圖：小鼠體重變化曲線

基于B6-hPD1/hLAG3小鼠皮下接種MC38模型的體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)。將結(jié)腸癌細(xì)胞MC38培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后接種至6-8周齡的B6-hPD1/hLAG3（PD1和LAG3同時(shí)人源化小鼠）皮下，待腫瘤生長(zhǎng)至平均體積約80-120mm³時(shí)隨機(jī)分為Vehicle組（n=7）、 anti-hPD1單藥組（n=6）、anti-hPD1和 anti-hLAG3聯(lián)用組（n=6），使用相應(yīng)藥物進(jìn)行治療。每周給藥2次，共給藥4次。數(shù)據(jù)以Mean ±SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示：anti-hPD1單藥組對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制作用小（TGI=25.64%），anti-hPD1和 anti-hLAG3聯(lián)用組對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制作用大（TGI=89.29%）（左圖），小鼠體重變化趨勢(shì)一致（右圖）。

結(jié)果證明：PD1/LAG3雙人源化小鼠是評(píng)估anti-hPD1和anti-hLAG3抗體體內(nèi)聯(lián)合藥效的有力工具。

參考文獻(xiàn)

[1] Sierro, Sophie, Pedro Romero, and Daniel E. Speiser. "The CD4-like molecule LAG-3, biology and therapeutic applications." Expert opinion on therapeutic targets 15.1 (2011): 91-101.

[2] Goldberg, Monica V., and Charles G. Drake. "LAG-3 in cancer immunotherapy." Cancer Immunology and Immunotherapy. Springer, Berlin, Heidelberg, 2010.269-278.

[3] Triebel, Frederic, et al. "LAG-3, a novel lymphocyte activation gene closely related to CD4." Journal of Experimental Medicine 171.5 (1990): 1393-1405.

[4] Huard, Bertrand, et al. "CD4/major histocompatibility complex class II interaction analyzed with CD4‐and lymphocyte activation gene‐3 (LAG‐3)‐Ig fusion proteins." European journal of immunology 25.9 (1995): 2718-2721.