PDL1是細(xì)胞程序性死亡配體1（Programmed cell death 1 ligand 1，PDL1），也稱為表面抗原分化簇274（cluster of differentiation 274，CD274）或 B7同源體1（B7 homolog 1，B7-H1），由CD274基因編碼，為40 kDa大小的I型跨膜蛋白。

大量研究證實(shí)，腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞表面PDL1表達(dá)增高，與活化的T細(xì)胞表面的PD1結(jié)合，傳遞抑制性調(diào)控信號(hào)，導(dǎo)致腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的凋亡或免疫無(wú)能，從而抑制免疫反應(yīng)。用抗體阻斷PD1/PDL1信號(hào)通路已成為腫瘤免疫治療的經(jīng)典方法^[1-2]。

構(gòu)建策略：集萃藥康通過(guò)將BALB/c及C57BL/6背景小鼠的PDL1細(xì)胞外部分替換為相應(yīng)的人源片段，完整保留了小鼠PDL1的細(xì)胞內(nèi)部分，成功構(gòu)建了PDL1人源化小鼠模型，包括單人源化小鼠BALB/c-hPDL1及C57BL/6-hPDL1和雙人源化小鼠BALB/c-hPD1/hPDL1及C57BL/6- hPD1/hPDL1。PDL1人源化小鼠模型是人PDL1抑制劑藥效評(píng)價(jià)及安全性評(píng)價(jià)的理想動(dòng)物模型。

1. BALB/c-hPDL1:TECENTRIQ^?藥效實(shí)驗(yàn)

在BALB/c-hPDL1小鼠皮下接種CT26-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人PDL1抗體TECENTRIQ^?（Atezolizumab）的腫瘤抑制藥效。

TECENTRIQ^?（Atezolizumab）：羅氏公司上市抗腫瘤藥物，抗人PD-L1抗體。

基于BALB/c-hPDL1小鼠皮下接種CT26-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)模型的體內(nèi)藥效試驗(yàn)。將表達(dá)人源PDL1蛋白的結(jié)腸癌細(xì)胞CT26-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后接種至6-8周齡的BALB/c-hPDL1人源化小鼠皮下，待腫瘤生長(zhǎng)至平均體積約100 mm³時(shí)隨機(jī)分為Vehicle（對(duì)照）組，Tecentriq給藥組（n=10），使用相應(yīng)藥物進(jìn)行治療。每3天給藥1次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示： Tecentriq (5 mpk)、 Tecentriq (10 mpk)、 Tecentriq (15 mpk)給藥組腫瘤體積抑制率（TGI）分別為59.62%、67.73%、66.99%，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用，并具有一定的劑量梯度依賴。

2. C57BL/6-hPDL1:TECENTRIQ^?藥效實(shí)驗(yàn)

在B6-hPDL1小鼠皮下接種MC38-hPDL1腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人PDL1抗體TECENTRIQ^?（Atezolizumab）的腫瘤抑制藥效。

小鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線 

基于B6-hPDL1小鼠皮下接種MC38-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)模型的體內(nèi)藥效試驗(yàn)。將表達(dá)人源PDL1蛋白的結(jié)腸癌細(xì)胞MC38-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后接種至6-8周齡的B6-hPDL1人源化小鼠皮下，待腫瘤生長(zhǎng)至平均體積約100 mm³時(shí)隨機(jī)分為Vehicle（對(duì)照）組，Tecentriq給藥組（n=8），使用相應(yīng)藥物進(jìn)行治療。每3天給藥1次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。

結(jié)果顯示： Tecentriq藥物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用（TGI=87%）。

結(jié)果表明：C57BL/6-/hPDL1小鼠是評(píng)價(jià)抗人PD1抗體、抗人PDL1抗體及聯(lián)合給藥的抗腫瘤作用的理想模型。

3. C57BL/6-hPD1/hPDL1：KEYTRUDA?及TECENTRIQ?藥效實(shí)驗(yàn)

在B6-hPD1/hPDL1小鼠模型皮下接種MC38-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)腫瘤細(xì)胞系后測(cè)試抗人PD1抗體KEYTRUDA^?（Pembrolizumab）及抗人PD-L1抗體TECENTRIQ^?（atezolizumab）腫瘤抑制藥效。

上圖：Tecentriq抗腫瘤藥效

上圖：Keytruda抗腫瘤藥效

基于C57BL/6-hPD1/hPDL1小鼠皮下接種MC38-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)模型的體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞MC38-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)接種至6-8周齡C57BL/6-hPD1/hPDL1小鼠皮下，待腫瘤生長(zhǎng)至平均體積約100 mm³左右時(shí)隨機(jī)分為Tecentriq (1 mpk)、Tecentriq (3 mpk)、 Tecentriq (10 mpk)、Keytruda (1 mpk)、Keytruda (3 mpk)、Keytruda (10 mpk) 給藥組(n=8)，并使用相應(yīng)的藥物進(jìn)行治療。每3天給藥1次，共給藥6次。

結(jié)果顯示：Tecentriq (1 mpk)、 Tecentriq (3 mpk)、 Tecentriq (10 mpk) 給藥組腫瘤體積抑制率（TGI）分別為48.26%、67.77%、88.52% ；Keytruda (1 mpk)、 Keytruda (3 mpk)、 Keytruda (10 mpk)給藥組的TGI分別為79.63%、96.45%、99.52% ，兩種抗體均對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用，并具有一定的劑量梯度依賴。

結(jié)果表明：C57BL/6-hPD1/hPDL1小鼠是評(píng)價(jià)抗人PD1抗體、抗人PDL1抗體及聯(lián)合給藥的抗腫瘤作用的理想模型。

參考文獻(xiàn)

[1] Immunotherapy: Benefit with anti-PD-L1. Nat Rev Clin Oncol. 2017, 14(2):70-71.

[2] Targeting the PD-1 pathway: a promising future for the treatment of melanoma. Arch Dermatol Res. 2014, 306(6):511-9.