PD1人源化模型
PD1(programmed cell death 1)是程序性細(xì)胞死亡受體1，屬于免疫球蛋白超家族I型跨膜糖蛋白，是一種重要的免疫抑制分子，為CD28超家族成員。以PD1為靶點的免疫調(diào)節(jié)對抗腫瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植排斥反應(yīng)等均有重要的意義。大量研究證實，腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞表面PDL1表達(dá)量增高，同時與活化的T細(xì)胞上的PD1結(jié)合，傳遞負(fù)調(diào)控信號，導(dǎo)致腫瘤抗原特異性T細(xì)胞的凋亡或功能衰竭，從而抑制免疫反應(yīng)，進(jìn)而促使腫瘤細(xì)胞的逃逸。用抗體阻斷PD1/PDL1信號通路已成為腫瘤免疫治療的經(jīng)典方法[1-3]。
構(gòu)建策略：集萃藥康將BALB/c及C57BL/6小鼠的PD1細(xì)胞外部分替換為相應(yīng)的人源片段，完整保留了小鼠PD1的胞內(nèi)部分，成功構(gòu)建了PD1單人源化小鼠模型，包括單人源化小鼠BALB/c-hPD1及C57BL/6-hPD1和雙人源化小鼠模型BALB/c-hPD1/hPDL1及C57BL/6- hPD1/hPDL1。PD1人源化小鼠模型是人PD1抑制劑藥效評價及安全性評價的理想動物模型。
1. C57BL/6-hPD1：KEYTRUDA?藥效實驗
在B6-hPD1小鼠皮下接種MC38腫瘤細(xì)胞系后測試不同劑量的抗人PD1抗體KEYTRUDA?（Pembrolizumab）的腫瘤抑制藥效。
KEYTRUDA?（Pembrolizumab）：默沙東公司上市抗腫瘤藥物，抗人PD1抗體。
左圖：小鼠腫瘤生長曲線 右圖：小鼠體重變化曲線
基于B6-hPD1小鼠皮下接種MC38模型的體內(nèi)藥效試驗(KEYTRUDA?)。將對數(shù)生長期的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞MC38接種至6-8周齡的B6-hPD1人源化小鼠皮下，待腫瘤生長至平均體積約100 mm3時隨機分為Vehicle（對照）組，KEYTRUDA? 1 mg/kg組，KEYTRUDA? 3 mg/kg組及KEYTRUDA?10 mg/kg組（n=8），并使用相應(yīng)劑量的藥物進(jìn)行治療。每3天給藥1次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。
結(jié)果顯示：不同劑量的KEYTRUDA?給藥對腫瘤生長抑制程度不同，10 mg/kg組腫瘤抑制效果最明顯（TGI=94.1%），劑量1 mg/kg及3 mg/kg三組腫瘤體積接近，TGI分別為83.7%和85.5%（左圖）。五組小鼠體重變化趨勢接近（右圖）。
結(jié)果證明： B6-hPD1小鼠是評估人PD1抗體藥效的理想動物模型。
2. BALB/c-hPD1/hPDL1：KEYTRUDA?藥效實驗
在BALB/c-hPD1/hPDL1小鼠皮下接種CT26-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)腫瘤細(xì)胞系后測試抗人PD1抗體KEYTRUDA?（Pembrolizumab）腫瘤抑制藥效。
KEYTRUDA?（Pembrolizumab）：默沙東公司上市抗腫瘤藥物，抗人PD1抗體。
小鼠腫瘤生長曲線
于BALB/c-hPD1/hPDL1小鼠皮下接種CT26-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO)模型的體內(nèi)藥效實驗。將對數(shù)生長期的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞CT26-hPDL1(Tg)-mPDL1(KO接種至6-8周齡BALB/c-hPD1/hPDL1小鼠皮下，待腫瘤生長至平均體積約100 mm3左右時隨機分為PBS組，Keytruda(0.3 mpk)，Keytruda(1 mpk)、Keytruda(3 mpk)給藥組 (n=8)，并使用相應(yīng)的藥物進(jìn)行治療，每周給藥2次，共給藥6次。數(shù)據(jù)以Mean ± SEM形式呈現(xiàn)。
結(jié)果顯示： Keytruda(0.3 mpk)，Keytruda(1 mpk)、Keytruda(3 mpk)給藥組的腫瘤體積抑制率（TGI）分別為43.49%、57.74%、64.67% 測試抗體均對腫瘤的生長有顯著抑制作用，并具有一定的劑量梯度依賴。
結(jié)果表明：BALB/c-hPD1/hPDL1小鼠可以用來評價抗人PD1抗體、抗人PDL1抗體及聯(lián)合給藥的抗腫瘤作用。
參考文獻(xiàn)
[1] PD1 Blockade with Cemiplimab in Advanced Cutaneous Squamous-Cell Carcinoma. N Engl J Med. 2018, 26;379(4):341-351.
[2] PD1 makes waves in anticancer immunotherapy. Nat Rev Drug Discov. 2012, 11(8):601.
[3] Coexpression of Tim-3 and PD-1 identifies a CD8+ T-cell exhaustion phenotype in mice with disseminated acute myelogenous leukemia. Blood. 2011,117(17):4501-10.