NCG是使用基因編輯技術(shù)敲除了NOD/ShiltJGpt小鼠的Prkdc（Protein kinase, DNA activated, catalyticpolypeptide）及 Il2rg（Common gamma chain receptor）基因而獲得的重度免疫缺陷品系。Prkdc基因功能缺失造成T細(xì)胞和B細(xì)胞不能發(fā)育成熟。IL2RG是多種白細(xì)胞介素細(xì)胞因子受體的共同亞基，IL2RG失活則導(dǎo)致多種不同細(xì)胞因子信號通路缺失，造成NK細(xì)胞缺陷。因此，NCG是迄今為止免疫系統(tǒng)缺陷最為徹底的小鼠模型之一，缺乏成熟的T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞，暫未出現(xiàn)隨著年齡的增長有免疫細(xì)胞滲漏的情況。

小鼠全身性輻照，尤其是X-RAY輻照，可能會出現(xiàn)輻照誘導(dǎo)的胃腸道綜合征（Radiation-induced gastrointestinal syndrom），主要表現(xiàn)：小鼠腸壁變薄，胃腸道內(nèi)的微生物侵襲引起胃腸道彌散性出血。另外，也可以考慮輻照前＞7d予以抗生素處理（集萃藥康HSC重建小鼠生產(chǎn)目前未使用），輻照后密切關(guān)注動物的飲食、飲水及體重情況，必要時(shí)給予碎飼料或營養(yǎng)膠輔助進(jìn)食，補(bǔ)充營養(yǎng)。

不同donor差異比較大，需要進(jìn)行廣泛的donor篩選。一般接種劑量1E7-2E7，發(fā)病時(shí)間7-21d都有可能，主要看donor的差異。這個(gè)篩選過程成本比較高，我司有篩選好的donor，客戶可以考慮直接在我司開展藥效實(shí)驗(yàn)。

這種情況是會出現(xiàn)的，由于細(xì)胞特性的不同、在動物體內(nèi)生長環(huán)境和培養(yǎng)皿環(huán)境的不同，會帶來細(xì)胞不同生長趨勢的結(jié)果，也和細(xì)胞接種量、動物選擇性有關(guān)。所以，建議對于新改造的或新購買的細(xì)胞，不要直接開展大規(guī)模的藥效，而是先做小規(guī)模的成瘤性測試，摸索成瘤條件，避免造成不必要的損失。

可以的。客戶需要提供支原體檢測報(bào)告，我司會做支原體檢測復(fù)核。因支原體是SPF動物房禁止帶入的微生物，也會對成瘤性測試或藥效實(shí)驗(yàn)帶來不準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？蛻艨商峁┰摷?xì)胞的小樣，支原體檢測報(bào)告為陰性的時(shí)候，方可啟動正式實(shí)驗(yàn)，正式實(shí)驗(yàn)細(xì)胞注射后還會留取小樣再進(jìn)行復(fù)核。

亞致死劑量的清髓（清除的不全是干細(xì)胞），目的是為了提高h(yuǎn)uHSC移植后小鼠體內(nèi)的重建水平。PBMC為外周血單個(gè)核細(xì)胞，該方法可以在較短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速的免疫系統(tǒng)重建，小鼠不需要提前清髓處理。

（1）細(xì)胞株自身的成瘤性：不同細(xì)胞株的成瘤快慢會有差異，建議正式實(shí)驗(yàn)之前參考已發(fā)文獻(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室前期成瘤條件，設(shè)置不同成瘤條件摸索細(xì)胞株成瘤性；

（2）細(xì)胞接種時(shí)的狀態(tài)及活率：建議取處于對數(shù)期生長的細(xì)胞進(jìn)行接種，接種前對細(xì)胞活率進(jìn)行檢測，接種過程中細(xì)胞置于冰上，保持低溫，接種完成后也可以留一小部分細(xì)胞檢測細(xì)胞活率，確保接種過程中細(xì)胞活率沒有明顯降低。另外，注意避免體外過度傳代影響細(xì)胞狀態(tài)；

（3）支原體、細(xì)菌污染：建議接種前對細(xì)胞進(jìn)行支原體和無菌檢測；

（4）接種的劑量：不同的細(xì)胞系、不同的小鼠周齡和接種位置所需要的細(xì)胞劑量會有差異，建議正式實(shí)驗(yàn)之前摸索出最佳細(xì)胞注射劑量；

（5）接種方式：常用的接種部位有皮下、尾靜脈和原位。原位多指腫瘤原發(fā)器官。建議根據(jù)細(xì)胞株成瘤性和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的接種部位；

（6）選擇的免疫缺陷小鼠：不同免疫缺陷程度的小鼠或不同周齡小鼠的成瘤速度有所差異，建議根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇合適的動物模型；

（7）其他輔助因子：根據(jù)細(xì)胞株類型選擇實(shí)驗(yàn)中是否需要添加輔助因子，如雌激素依賴腫瘤接種時(shí)需要埋入雌激素片；

（8）適應(yīng)性飼養(yǎng)：小鼠在運(yùn)輸過程中會產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，使小鼠出現(xiàn)一系列的病理生理學(xué)變化，這些變化會增加某些實(shí)驗(yàn)誤差，因此在接到動物后應(yīng)盡量避免立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，建議讓動物有1~2周的適應(yīng)期；

（9）飼養(yǎng)環(huán)境：免疫缺陷小鼠對飼養(yǎng)環(huán)境的要求很高，必須飼養(yǎng)在SPF級屏障設(shè)施內(nèi)，且與免疫正常小鼠飼養(yǎng)在不同房間。如果環(huán)境設(shè)施不達(dá)標(biāo)，有可能會間接影響腫瘤模型的制備：裸鼠長期暴露在弱抗原的刺激下，NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活力逐步增強(qiáng)，會導(dǎo)致裸鼠對腫瘤的非特異性免疫力增強(qiáng)；NCG及NCG相關(guān)背景品系是重度免疫缺陷模型，對病原體易感，飼養(yǎng)環(huán)境清潔消毒不足，會造成環(huán)境微生物富集，對這一類小鼠帶來健康風(fēng)險(xiǎn)。

荷瘤實(shí)驗(yàn)是否成功受很多因素的影響，以上建議僅供參考。另外，個(gè)體差異和腫瘤生長的速度不完全同步，實(shí)驗(yàn)中建議適當(dāng)增加小鼠的富余量。

相同點(diǎn)：腫瘤組織或者細(xì)胞來源于癌癥病人。

不同點(diǎn)：PDX是病人的腫瘤組織瘤塊，保留了腫瘤的微環(huán)境和異質(zhì)性，個(gè)體間差異較大，建模與臨床更為接近，但PDX生長周期較長，均一性較差。藥康大部分PDX樣本為凍存狀態(tài)，藥效周期為：復(fù)蘇接種小鼠生長至可傳代（2-4個(gè)月）+傳代后生長給藥評價(jià)藥效（2-4個(gè)月）共需約4-8個(gè)月時(shí)間，不同PDX腫瘤周期差異較大。

CDX是經(jīng)過體外建立的穩(wěn)定細(xì)胞株，細(xì)胞荷瘤均一性較好，個(gè)體間的一致性較高，但CDX生長較快，一般細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)（10~15天）+接種小鼠給藥評價(jià)（1.5~2.5個(gè)月），周期較短。

應(yīng)用差異：CDX可用于藥物的初期篩選，有前人研究結(jié)果，細(xì)胞背景比較清晰。PDX對于個(gè)體而言，可用于精準(zhǔn)醫(yī)療藥效預(yù)測，篩選更為合適的藥物；對于藥企而言，可用于藥物受眾的篩選，選擇更加準(zhǔn)確的適應(yīng)癥。

根據(jù)供體和受體的來源不同，分為兩類。

1）異種移植模型（Xenograft transplantation model），選用人源的腫瘤，接種到免疫缺陷小鼠皮下，一般用于化療藥物、ADC藥物、細(xì)胞治療等篩選，若免疫缺陷小鼠進(jìn)行人免疫系統(tǒng)重建，也可用于免疫治療類藥物篩選；

2）同種移植模型（Allograft transplantation model），選用鼠源的腫瘤，接種到免疫正常的同背景小鼠皮下，常用于大分子抗體、ADC藥物、化療藥物及靶向藥物評價(jià)。