（1）細(xì)胞株自身的成瘤性：不同細(xì)胞株的成瘤快慢會有差異，建議正式實(shí)驗(yàn)之前參考已發(fā)文獻(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室前期成瘤條件，設(shè)置不同成瘤條件摸索細(xì)胞株成瘤性；

（2）細(xì)胞接種時(shí)的狀態(tài)及活率：建議取處于對數(shù)期生長的細(xì)胞進(jìn)行接種，接種前對細(xì)胞活率進(jìn)行檢測，接種過程中細(xì)胞置于冰上，保持低溫，接種完成后也可以留一小部分細(xì)胞檢測細(xì)胞活率，確保接種過程中細(xì)胞活率沒有明顯降低。另外，注意避免體外過度傳代影響細(xì)胞狀態(tài)；

（3）支原體、細(xì)菌污染：建議接種前對細(xì)胞進(jìn)行支原體和無菌檢測；

（4）接種的劑量：不同的細(xì)胞系、不同的小鼠周齡和接種位置所需要的細(xì)胞劑量會有差異，建議正式實(shí)驗(yàn)之前摸索出最佳細(xì)胞注射劑量；

（5）接種方式：常用的接種部位有皮下、尾靜脈和原位。原位多指腫瘤原發(fā)器官。建議根據(jù)細(xì)胞株成瘤性和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的接種部位；

（6）選擇的免疫缺陷小鼠：不同免疫缺陷程度的小鼠或不同周齡小鼠的成瘤速度有所差異，建議根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇合適的動物模型；

（7）其他輔助因子：根據(jù)細(xì)胞株類型選擇實(shí)驗(yàn)中是否需要添加輔助因子，如雌激素依賴腫瘤接種時(shí)需要埋入雌激素片；

（8）適應(yīng)性飼養(yǎng)：小鼠在運(yùn)輸過程中會產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，使小鼠出現(xiàn)一系列的病理生理學(xué)變化，這些變化會增加某些實(shí)驗(yàn)誤差，因此在接到動物后應(yīng)盡量避免立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，建議讓動物有1~2周的適應(yīng)期；

（9）飼養(yǎng)環(huán)境：免疫缺陷小鼠對飼養(yǎng)環(huán)境的要求很高，必須飼養(yǎng)在SPF級屏障設(shè)施內(nèi)，且與免疫正常小鼠飼養(yǎng)在不同房間。如果環(huán)境設(shè)施不達(dá)標(biāo)，有可能會間接影響腫瘤模型的制備：裸鼠長期暴露在弱抗原的刺激下，NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活力逐步增強(qiáng)，會導(dǎo)致裸鼠對腫瘤的非特異性免疫力增強(qiáng)；NCG及NCG相關(guān)背景品系是重度免疫缺陷模型，對病原體易感，飼養(yǎng)環(huán)境清潔消毒不足，會造成環(huán)境微生物富集，對這一類小鼠帶來健康風(fēng)險(xiǎn)。

荷瘤實(shí)驗(yàn)是否成功受很多因素的影響，以上建議僅供參考。另外，個(gè)體差異和腫瘤生長的速度不完全同步，實(shí)驗(yàn)中建議適當(dāng)增加小鼠的富余量。

相同點(diǎn)：腫瘤組織或者細(xì)胞來源于癌癥病人。

不同點(diǎn)：PDX是病人的腫瘤組織瘤塊，保留了腫瘤的微環(huán)境和異質(zhì)性，個(gè)體間差異較大，建模與臨床更為接近，但PDX生長周期較長，均一性較差。藥康大部分PDX樣本為凍存狀態(tài)，藥效周期為：復(fù)蘇接種小鼠生長至可傳代（2-4個(gè)月）+傳代后生長給藥評價(jià)藥效（2-4個(gè)月）共需約4-8個(gè)月時(shí)間，不同PDX腫瘤周期差異較大。

CDX是經(jīng)過體外建立的穩(wěn)定細(xì)胞株，細(xì)胞荷瘤均一性較好，個(gè)體間的一致性較高，但CDX生長較快，一般細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)（10~15天）+接種小鼠給藥評價(jià)（1.5~2.5個(gè)月），周期較短。

應(yīng)用差異：CDX可用于藥物的初期篩選，有前人研究結(jié)果，細(xì)胞背景比較清晰。PDX對于個(gè)體而言，可用于精準(zhǔn)醫(yī)療藥效預(yù)測，篩選更為合適的藥物；對于藥企而言，可用于藥物受眾的篩選，選擇更加準(zhǔn)確的適應(yīng)癥。

根據(jù)供體和受體的來源不同，分為兩類。

1）異種移植模型（Xenograft transplantation model），選用人源的腫瘤，接種到免疫缺陷小鼠皮下，一般用于化療藥物、ADC藥物、細(xì)胞治療等篩選，若免疫缺陷小鼠進(jìn)行人免疫系統(tǒng)重建，也可用于免疫治療類藥物篩選；

2）同種移植模型（Allograft transplantation model），選用鼠源的腫瘤，接種到免疫正常的同背景小鼠皮下，常用于大分子抗體、ADC藥物、化療藥物及靶向藥物評價(jià)。

1.1. 癱瘓

癱瘓的小鼠身體部分或全部行動能力喪失，是由于神經(jīng)或者肌肉系統(tǒng)功能障礙導(dǎo)致的自主運(yùn)動功能喪失。日常飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)，如網(wǎng)格操作不當(dāng)壓迫小鼠腰椎或者手術(shù)、保定操作不當(dāng)，造成脊髓損傷進(jìn)而導(dǎo)致小鼠癱瘓。此外，病原感染，如多瘤病毒或腦脊髓炎病毒感染可能導(dǎo)致小鼠癱瘓。

對于癱瘓小鼠，需要在它觸之可及的地方放置水和食物，更換柔軟的墊料以免小鼠在墊料上拖行時(shí)造成皮膚損傷。當(dāng)癱瘓小鼠出現(xiàn)體重驟降、褥瘡或自殘行為時(shí)，需及時(shí)進(jìn)行安樂死。

1.2. 轉(zhuǎn)圈、原地跳躍等刻板行為

刻板行為是一種功能失調(diào)的異常行為，通常因異常環(huán)境所致。常見的刻板行為包括轉(zhuǎn)圈、網(wǎng)格磨牙、原地跳躍、旋轉(zhuǎn)等。這些刻板行為沒有任何功能性意義，具有高度持續(xù)性和重復(fù)性，并且隨著時(shí)間推移該行為可能會逐漸強(qiáng)化。對于出現(xiàn)刻板行為的小鼠建議增加環(huán)境豐容以緩解刻板行為。

環(huán)尾

小鼠尾巴呈環(huán)形收縮、分節(jié)狀，甚至出現(xiàn)水腫和壞死，有時(shí)也伴隨足趾腫脹。傳統(tǒng)上認(rèn)為環(huán)尾是相對濕度低引起的環(huán)境疾病，但其他因素如溫度、飲食不足、遺傳易感性和籠養(yǎng)類型也可能引起環(huán)尾。對于環(huán)尾小鼠建議淘汰，同時(shí)注意環(huán)境，關(guān)注濕度控制。

1. 陰 道脫垂

小鼠發(fā)生陰 道脫垂時(shí)，可見會陰 部有粉色或紅色的陰 道組織脫出，可能繼發(fā)于陰 道增生，或過度的腹部收縮（產(chǎn)仔）。

輕微脫垂可以通過用高滲溶液處理暴露的組織以減少腫脹，還納后持續(xù)觀察；脫垂嚴(yán)重者建議安樂死。另外，出現(xiàn)過陰 道脫垂的小鼠不建議用作繁育。

2. 陰 莖脫垂

雄性小鼠的陰 莖脫出包皮之外，無法回縮，可能伴有陰 莖腫脹、破損、甚至壞疽。交配時(shí)陰 莖損傷、麻醉過量等均可能導(dǎo)致陰 莖脫垂。

陰 莖脫垂的動物無法進(jìn)行正常交配，即使進(jìn)行相應(yīng)處理后，頻繁的交配也會增加復(fù)發(fā)的概率，不建議用作繁育。

1. 腹瀉

小鼠發(fā)生腹瀉時(shí)糞便含水量較多，分為軟便和水便兩種情況?？赏ㄟ^觀察糞便的性狀、小鼠肛 門處糞便沾染情況等進(jìn)行判斷。

導(dǎo)致腹瀉的原因有很多，包括：

(1) 環(huán)境因素：如動物處在應(yīng)激狀態(tài)（如冷刺激）

(2) 感染因素：多種病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染

(3) 營養(yǎng)因素：如某些微量元素缺乏

(4) 其他因素：如藥物、化療等

對于腹瀉的小鼠，首先要排查病因、對癥治療。此外，對于腹瀉小鼠需注意保暖和補(bǔ)水。

2. 直腸脫垂

直腸粘膜在直腸開口外外翻，在肛 門處可見一個(gè)紅色組織，即直腸脫垂。

小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸相對較短且支持較差，缺少漿膜覆蓋。在該解剖學(xué)特性下，當(dāng)小鼠發(fā)生腹瀉、腸道腫塊/腫瘤、增殖性/炎性盲腸炎、結(jié)腸炎時(shí)易發(fā)生直腸脫垂。此外，分娩或排便時(shí)的緊張用力、微生物或寄生蟲感染等均可能發(fā)生直腸脫垂。

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1.1. 結(jié)膜炎

患有結(jié)膜炎的小鼠通?？梢娧壑芷つw紅腫、流淚，甚至出現(xiàn)角膜渾濁。細(xì)菌感染和環(huán)境刺激（粉塵、氨氣、消毒液等）均可能引起小鼠結(jié)膜炎。

日常飼養(yǎng)過程中保持籠盒內(nèi)清潔可減少結(jié)膜炎發(fā)生的概率。對于患病小鼠，建議排查并去除病因，對患眼進(jìn)行消毒處理（需要注意人為操作造成的交叉感染）。

1.2. 歪頭

小鼠出現(xiàn)歪頭多是由于前庭綜合征引起的。引起前庭綜合征的原因有多種，如遺傳、中耳或內(nèi)耳感染、腫瘤、腦膜炎、頭部損傷、藥物引起的耳毒性等。除部分病原引起中耳炎導(dǎo)致的歪頭具有傳染性外，多數(shù)情況下小鼠歪頭為偶發(fā)，不存在傳染性，一般不影響整群動物。

1.3. 牙齒咬合不正

小鼠出現(xiàn)牙齒咬合不正，也就是通常所說的牙長，主要有兩種原因：

(1) 先天性，如C57BL/6背景小鼠或BALB/cJ和BALB/cByJ背景小鼠有一定概率發(fā)生先天性牙齒咬合不正。對于先天性牙齒咬合不正的小鼠建議淘汰，否則需要定期進(jìn)行牙齒修剪。

(2) 因食物過軟導(dǎo)致無法充分磨牙、牙齒過度生長。對此，需注意飼料硬度，可考慮增加磨牙玩具。

1. 皮膚顏色

小鼠皮膚顏色受毛發(fā)生長周期的影響，正常毛發(fā)的生長周期分為生長期 、退行期和休止期三個(gè)階段。以 C57BL/6 小鼠為例：當(dāng)毛發(fā)生長處于生長期、退行期和休止期時(shí)，與之對應(yīng)的皮膚會分別呈現(xiàn)出黑色、灰色、粉色。因此，對于同一個(gè)品系的不同小鼠，因?yàn)槊l(fā)處于不同的生長周期，脫毛后可能會觀察到皮膚呈現(xiàn)不同顏色。而對于不同毛色的品系小鼠，即使處于相同的毛發(fā)生長周期，所呈現(xiàn)的皮膚顏色也不相同。

毛囊生長周期不一致是小鼠皮膚顏色不均勻的原因。小鼠飼養(yǎng)過程中，外界刺激會影響皮膚顏色的變化，如局部理毛、人為剃毛等會導(dǎo)致局部毛發(fā)生長周期重新啟動，進(jìn)而使局部皮膚呈現(xiàn)不同的顏色，肉眼所見存在顏色斑駁。另外，激素、營養(yǎng)、情緒及藥物等因素均對毛發(fā)周期也有一定的影響。

通常情況下，該現(xiàn)象對小鼠狀態(tài)沒有影響，如果進(jìn)行皮膚相關(guān)研究，對小鼠皮膚有特殊要求，可提前溝通討論需求。

2. 脫毛

導(dǎo)致小鼠脫毛的原因有以下幾類：

(1) 機(jī)械性因素：如同籠小鼠剃毛或過度理毛；小鼠于籠具之間反復(fù)摩擦導(dǎo)致脫毛。

(2) 病理性因素：如螨蟲、真菌等感染可能導(dǎo)致小鼠脫毛，可通過臨床癥狀結(jié)合微生物檢測進(jìn)行確診。

(3) 生理性因素：如激素水平失衡導(dǎo)致脫毛。

(4) 化學(xué)性因素：如季銨鹽類消毒液可導(dǎo)致小鼠脫毛。

(5) 營養(yǎng)性因素：如必需氨基酸和維生素的缺乏可能導(dǎo)致小鼠脫毛。

其中，小鼠理毛造成的脫毛行為較為常見。B6及其相關(guān)品系易發(fā)生理毛行為，同窩鼠會互相理毛，造成胡須，背部，眼周，耳朵部位出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，壓力、飼養(yǎng)環(huán)境、季節(jié)、飲食都可能導(dǎo)致該情況的發(fā)生。正常理毛裸 露部位的皮膚是正常的，無結(jié)痂或紅腫，將鼠分籠后，一般后期毛發(fā)會自然長出。而過度理毛造成潰瘍性皮膚損傷，建議以碘酒擦拭傷口，一天1-2次，一周左右可以改善。適當(dāng)在籠盒內(nèi)添加一些環(huán)境豐富物品給動物玩耍，比如添加紙杯、窩料、玩具，可減輕理毛現(xiàn)象。

3. 打架外傷

同種動物個(gè)體之間常由于爭奪領(lǐng)地、食物、配偶而發(fā)生相互攻擊或者打架。打架在雄性小鼠、雌性小鼠、繁殖籠中均存在，雄性小鼠中最常見，BALB/c、SJL和FVB等品系比較好斗。

打架引起的損傷包含創(chuàng)傷和脫毛。創(chuàng)傷通常出現(xiàn)在尾巴、下背部、臀部和生殖器，表現(xiàn)為創(chuàng)口、出血或者結(jié)痂。脫毛主要發(fā)生在下背部，上背部和臀部。

為了預(yù)防小鼠打架，可以增加籠盒內(nèi)的環(huán)境豐榮（坐窩紙、福利玩具）、降低飼養(yǎng)密度、避免非同窩雄鼠同籠飼養(yǎng)、選擇雌性或者溫和品系小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，減少小鼠打架機(jī)率。如已有小鼠受傷，可以將受傷小鼠單獨(dú)拎出飼養(yǎng)；如一籠內(nèi)多只小鼠受傷也可以將“肇事者”單獨(dú)拎出飼養(yǎng)。對于輕度外傷，可使用碘伏等局部清潔消毒處理或者抗生素治療，加強(qiáng)觀察；對于嚴(yán)重外傷者需安樂死處理。單獨(dú)飼養(yǎng)的小鼠，除了給福利玩具，籠盒要放在其他小鼠中間，可看到其他的同伴，后期不建議再合籠飼養(yǎng)。

4. 潰瘍性皮炎

由于皮膚瘙癢，小鼠過度抓撓該區(qū)域，造成表皮擦傷并可能繼發(fā)感染機(jī)會性致病細(xì)菌，發(fā)展成深部潰瘍。目前潰瘍性皮炎的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，已知多因素可能使小鼠易患潰瘍性皮炎，包括遺傳因素、年齡、性別、飲食、環(huán)境、體外寄生蟲感染等。

對于輕度潰瘍性皮炎的小鼠，清潔、消毒皮膚病灶，結(jié)合修剪小鼠后肢趾甲，可有效治療輕度潰瘍性皮炎。對于重度潰瘍性皮炎，建議安樂死處理。

5. 毛發(fā)凌亂

健康的小鼠會定期理毛，被毛整潔、平滑而有光澤。小鼠出現(xiàn)毛發(fā)凌亂可能是存在某些問題未進(jìn)行理毛，如因疼痛或疾病導(dǎo)致無力理毛；室內(nèi)寒冷、營養(yǎng)不良、過度肥胖而無法理毛；特殊品系隨年齡增長而出現(xiàn)毛發(fā)油膩、凌亂等。

6. 黃疸/蒼白/青紫

皮膚蒼白是貧血的表現(xiàn)。除相關(guān)疾病模型外（如鐮刀紅細(xì)胞模型），營養(yǎng)因素和感染因素也可能導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)貧血。

皮膚黃染主要與肝膽相關(guān)疾病有關(guān)，如肝細(xì)胞功能低下、膽管梗阻等。

皮膚青紫即皮膚發(fā)紺，主要是血紅蛋白氧含量不足所致。常見于低溫、心力衰竭等情況。

對于出現(xiàn)黃疸、蒼白、青紫等異常皮膚顏色的小鼠，建議安樂死。

7. 鱗狀皮膚

鱗狀皮膚多由皮膚過度角化引發(fā)，主要表現(xiàn)為皮膚干燥、粗糙，伴有菱形或多角形白色鱗屑，鱗屑緊貼皮膚，邊緣輕度游離。

小鼠出現(xiàn)鱗狀皮膚的原因有多種，包括：

(1) 感染性因素：如牛棒狀桿菌、木糖葡萄球菌感染等。

(2) 基因突變：如銀屑病小鼠模型。

(3) 物理因素：如紫外照射會導(dǎo)致裸鼠表皮細(xì)胞更新速度加快，角化過度，出現(xiàn)大量白色鱗屑。

(4) 化學(xué)因素：使用氮芥、咪喹莫特處理小鼠皮膚可能出現(xiàn)鱗狀皮膚。

(5) 其他因素：包括環(huán)境濕度、營養(yǎng)因素等。

8. 腫物

小鼠身體各部分出現(xiàn)凸起或腫物，需要經(jīng)獸醫(yī)的專業(yè)初檢、剖檢甚至病理分析進(jìn)行綜合判斷。腫物出現(xiàn)在皮下，可能是腫瘤、血腫、膿腫、氣腫等；腫物出現(xiàn)在腹腔可能是懷孕、臟器異常等。