皮下是構(gòu)建異體移植腫瘤（Cell line-derived xenograft, CDX）模型常用的接種部位。皮下荷瘤實驗看似簡單，但實際上很多細節(jié)都不容忽視，不規(guī)范的操作會造成實驗過程中不必要的時間和材料的浪費。接下來，和大家分享一些影響皮下荷瘤的因素，供大家參考。

影響因素一 細胞

1.細胞系特性

不同細胞株的成瘤快慢會有差異，建議正式實驗之前開展預實驗，摸索細胞株成瘤性，同時參考已發(fā)文獻。

2.細胞狀態(tài)

細胞培養(yǎng)操作過程要注意防止污染。支原體污染極為常見，會改變培養(yǎng)細胞的代謝、增殖特征及形態(tài)等，從而影響腫瘤生長和結(jié)果的可重復性。建議接種前對細胞進行支原體檢測。

細胞活力是影響腫瘤形成的重要原因，接種細胞建議取處于對數(shù)期生長的細胞，接種前對細胞活率進行檢測，接種過程中細胞置于冰上，保持低溫，接種完成后也可以留一小部分細胞檢測細胞活率，確保接種過程中細胞活率沒有明顯降低。另外，注意避免體外過度傳代影響細胞狀態(tài)。

影響因素二 動物

常用的免疫缺陷小鼠品系有：裸鼠、NOD-Scid、NCG等。不同免疫缺陷程度的小鼠或小鼠不同周齡的成瘤速度有所差異，建議根據(jù)預實驗結(jié)果選擇合適的動物模型，同時參考已發(fā)表的文獻。選擇小鼠周齡不宜過大，如，裸鼠8周齡以上NK細胞等免疫細胞活力開始增強，一般來說，4～6周齡的裸鼠更容易成瘤，這時免疫系統(tǒng)不夠強，成瘤率相對較高。

影響因素三 接種部位

皮下注射主要有4個位點（如下圖所示），建議根據(jù)細胞株成瘤性和實驗目的選擇合適的接種部位。一般認為腋下皮下（3號位）血供充足，利于腫瘤細胞增殖，且右側(cè)操作較方便。如果個別瘤種生長速度較快，可以接種后肢或背部等供血量不是特別充足的地方，或者降低細胞接種劑量，減緩腫瘤生長速度。

影響因素四 接種量

不同的細胞系、不同的小鼠和接種位置所需要的細胞劑量會有差異，建議正式實驗之前開展預實驗，接種量設(shè)置多個梯度，摸索出最佳細胞注射劑量。

另外，可以根據(jù)細胞株類型選擇實驗中是否需要添加輔助因子，如matrigel、hormone等。如果成瘤性不好，可嘗試在細胞懸液（PBS溶）中添加基質(zhì)膠（根據(jù)說明書比例，一般體積比1：1，冰上操作），提供細胞外基質(zhì)營養(yǎng)。乳腺癌一般均會加雌激素，接種細胞需單獨注射雌激素。

影響因素五 飼養(yǎng)管理

小鼠在運輸過程中會產(chǎn)生應激反應，使小鼠出現(xiàn)一系列的病理生理學變化，這些變化會增加某些實驗誤差，因此在接到動物后應盡量避免立即進行實驗，建議讓動物有1~2周的適應期。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境較差會影響小鼠狀態(tài)，進而影響實驗結(jié)果，嚴重時造成小鼠死亡。免疫缺陷小鼠對飼養(yǎng)環(huán)境的要求很高，必須飼養(yǎng)在SPF級屏障設(shè)施內(nèi)，且與免疫正常小鼠飼養(yǎng)在不同房間。如果環(huán)境設(shè)施不達標，有可能會間接影響腫瘤模型的制備：裸鼠長期暴露在弱抗原的刺激下，NK細胞等免疫細胞的活力逐步增強，會導致裸鼠對腫瘤的非特異性免疫力增強；NCG及NCG相關(guān)背景品系是重度免疫缺陷模型，對病原體易感，飼養(yǎng)環(huán)境清潔消毒不足，會造成環(huán)境微生物富集，對這一類小鼠帶來健康風險。

荷瘤實驗是否成功受很多因素的影響，以上建議僅供參考。另外，個體差異無法避免，腫瘤生長的速度可能不完全同步，實驗中建議適當增加小鼠的富余量。